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彗星實(shí)驗(yàn)

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項(xiàng)目介紹

單細(xì)胞凝膠電泳是檢測DNA損傷快速、簡便、敏感、經(jīng)濟(jì)的方法，因其細(xì)胞電泳形狀頗似彗星，又稱彗星試驗(yàn)（cometassay）。

技術(shù)原理：基于有核細(xì)胞的DNA分子量很大，在DNA超螺旋結(jié)構(gòu)附著在核基質(zhì)中，用瓊脂糖凝膠電泳將細(xì)胞包埋在載玻片上，在細(xì)胞裂解液作用下，細(xì)胞膜、核膜及其他生物膜破壞，使細(xì)胞內(nèi)的RNA、蛋白質(zhì)及其他成分進(jìn)入凝膠，繼而擴(kuò)散到裂解液中，唯獨(dú)核DNA仍保持纏繞的環(huán)區(qū)附著在剩余的核骨架上，并留在原位。如果細(xì)胞未受損傷，電泳中核DNA因其分子量大而停留在核基質(zhì)中，經(jīng)熒光染色后呈現(xiàn)圓形的熒光團(tuán)，無拖尾現(xiàn)象。若細(xì)胞受損，在堿性電泳液（PH>13中），先是DNA雙鏈解螺旋且堿變性為單鏈，單鏈斷裂的碎片分子量小即可進(jìn)入凝膠中，在電泳時(shí)斷鏈或碎片離開DNA向陽極遷移，形成拖尾。細(xì)胞核DNA損傷損傷愈重，產(chǎn)生的斷鏈或堿易變性片段就愈多，其斷鏈或短片也就愈小，在電場作用下遷移的DNA量多，遷移的距離長，表現(xiàn)為尾長增加和尾部熒光強(qiáng)度增強(qiáng)。因此，通過測定DNA遷移部分的光密度或遷移長度就可定量測定單個(gè)細(xì)胞DNA損傷程度。目前用于彗星試驗(yàn)的細(xì)胞主要有兩大類：原位生物細(xì)胞和哺乳動(dòng)物細(xì)胞。

樣品要求

1、細(xì)胞樣本：每個(gè)檢測樣本需提供5*10^5細(xì)胞量。

2、新鮮組織樣本：需要24h內(nèi)，4℃運(yùn)輸?shù)竭_(dá)實(shí)驗(yàn)室。

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