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細(xì)胞毒性/增殖

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項(xiàng)目介紹

細(xì)胞增殖及毒性檢測(cè)是生物相容性測(cè)試的一種，檢測(cè)藥物或者新型材料在生物環(huán)境中的毒性情況，即通過(guò)檢測(cè)材料或者藥物對(duì)細(xì)胞的增殖或者生長(zhǎng)的影響，來(lái)評(píng)價(jià)藥物或材料的毒性或者活性，主要用于藥物活性篩選、細(xì)胞增殖測(cè)定、細(xì)胞毒性測(cè)定、抗腫瘤藥效測(cè)定等；常用MTT法或者CCK-8法檢測(cè)。

操作流程：

（1）收集對(duì)數(shù)期細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞懸液濃度3x10⁴~5x10⁴個(gè)/mL；

（2）96孔加入細(xì)胞懸液，100ul/孔，邊緣用pbs填充，5%CO₂、37℃孵育；

（3）培養(yǎng)24h后給藥，設(shè)置3~6個(gè)復(fù)孔，5%CO₂、37℃孵育；

（4）孵育適當(dāng)時(shí)間后，棄舊液，用無(wú)血清培養(yǎng)基與CCK8按照10:1稀釋200ul/孔/無(wú)血清培養(yǎng)基與MTT按照9:1稀釋?zhuān)?00ul/孔，繼續(xù)培養(yǎng)至所需時(shí)間點(diǎn)；

（5）CCK8: 時(shí)間到后，酶標(biāo)儀450nm/處測(cè)量各孔的吸光值。

客戶提供：

（1）足量樣品、樣品信息（如細(xì)胞類(lèi)型、分子量、溶解性、穩(wěn)定性、保存條件等）；
（2）相關(guān)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)內(nèi)容（如樣品作用時(shí)間、濃度等、細(xì)胞株等）。

樣品要求

1.待測(cè)樣品（濃度用戶指定）、實(shí)驗(yàn)方案、相關(guān)細(xì)胞、試劑盒及生物耗材等，平臺(tái)可有償提供。

項(xiàng)目案列

常見(jiàn)問(wèn)題

MTT法檢測(cè)細(xì)胞活性原理

在活細(xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能將外源性MTT還原為不溶于水的藍(lán)紫色甲臢化合物，用二甲基亞砜（DMSO）將其溶解成溶液，用酶標(biāo)儀測(cè)定其濃度（OD490或者570)，從而定量測(cè)定細(xì)胞的存活比例，細(xì)胞增殖越多越快，對(duì)應(yīng)的吸光度越高；細(xì)胞毒性越大，對(duì)應(yīng)的吸光度越低。

CCK8法檢測(cè)細(xì)胞活性原理

CCK-8細(xì)胞活性檢測(cè)試劑中含有WST-8 —— 一種類(lèi)似于MTT的化合物，在電子耦合試劑存在的情況下，可以為線粒體內(nèi)的脫氫酶驗(yàn)明正身。在脫氫酶作用下，WST-8被還原生成橙黃色的甲瓚產(chǎn)物，用酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀在OD 450nm波長(zhǎng)處測(cè)定其光吸收值。細(xì)胞增殖越多越快，則顏色越深；細(xì)胞毒性越大，則顏色越淺。對(duì)于同樣的細(xì)胞，顏色的深淺和細(xì)胞數(shù)目呈線性關(guān)系。

相較于MTT法，CCK8試劑盒的優(yōu)點(diǎn)有哪些？

1.使用方便，省去了洗滌細(xì)胞，不需要放射性同位素和有機(jī)溶劑；

2.CCK-8法能快速檢測(cè)；

3.CCK-8法的檢測(cè)靈敏度很高，甚至可以測(cè)定較低細(xì)胞密度；

4.CCK-8法的重復(fù)性優(yōu)于MTT 法；

5. CCK8適用于貼壁細(xì)胞和懸浮細(xì)胞；如樣品容易沉淀或殘留且易溶于DMSO，建議選用CCK8法檢測(cè)。

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