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    實(shí)時(shí)熒光定量PCR（qPCR）的實(shí)驗(yàn)步驟解析
    來源： 時(shí)間：2022-12-29 09:33:40 瀏覽：4944次

    qPCR: Quantitative Real-time PCR,中文名是實(shí)時(shí)熒光定量PCR。qPCR是一種在DNA擴(kuò)增反應(yīng)中，以熒光化學(xué)物質(zhì)測每次聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）循環(huán)后產(chǎn)物總量的方法。通過內(nèi)參對待測樣品中的特定DNA序列進(jìn)行定量分析的方法。

    TakaRa 試劑盒PrimeScript? RT reagent Kit with gDNA Eraser (Perfect Real Time)，SYBRGreenⅠ法。

    實(shí)驗(yàn)步驟：

    一，去除基因組DNA反應(yīng)：

    全波長酶標(biāo)儀測出RNA濃度（單位ng/ul）;按照以下劑量配制10ul體系

    試劑使用量
    5×gDNA Eraser Buffer2 μl
    Buffer 2.0 μl gDNA Eraser1 ul
    Total RNA1ug/RNA濃度
    RNase Free dH2OUp to10 ul

    PCR程序：42℃ 2min

    4℃ ∞

    二，反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)：

    按照以下劑量配制20ul體系：

    試劑使用量
    步驟 1 的反應(yīng)液10 ul
    PrimeScript RT Enzyme Mix I1 ul
    RT Primer Mi1 ul
    5×PrimeScript Buffer 2（for Real Time）4 ul
    RNase Free dH2O4 ul
    Total20 ul

    PCR程序：37℃ 15min

    85℃ 5s

    4℃ ∞

    三，Real Time PCR

    按照以下劑量配制20ul體系：

    試劑使用量
    SYBR@ Premix Ex TaqII(2X）10 ul
    F Primer(10uM)0.8 ul
    R Primer(10uM)0.8 ul
    ROX Reference II0.4 ul
    反應(yīng)2的DNA模板2 ul
    ddH2O6 ul

    四，儀器設(shè)置

    儀器使用的是熒光定量PCR儀Q6-96，設(shè)置界面如下圖：

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    全部 3小時(shí)前 四川
    文字是人類用符號記錄表達(dá)信息以傳之久遠(yuǎn)的方式和工具?，F(xiàn)代文字大多是記錄語言的工具。人類往往先有口頭的語言后產(chǎn)生書面文字，很多小語種，有語言但沒有文字。文字的不同體現(xiàn)了國家和民族的書面表達(dá)的方式和思維不同。文字使人類進(jìn)入有歷史記錄的文明社會(huì)。
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